高通量实时荧光定量PCR仪     预约
	管理人员	黄婷妹	仪器型号	罗氏 Light cycler 480II
	联系电话	021-54341003	放置位置	闵行校区生科院132
	使用方向	对外开放	仪器状态	正常

仪器收费标准（院内、院外、校外）： 

院内🚴‍♀️：40 元/小时　

院外：80 元/小时 　

校外：160 元/小时

技术参数：

◆ 温度均一性：± 0.1 ℃

◆ 可检测荧光染料：SYBR Green I、Hex、CyCyan 500🫳🏻、 FAM、VIC等

◆ 样品孔数😮‍💨：384个

◆ 动力学范围广：可同时检测到 1 - 10E¹⁰个拷贝DNA

◆ 高分辨率👨🏻‍🏫：轻松区分 1,000 与 2,000 拷贝浓度差异

◆ 高速：40 min 完成 40 个 PCR 循环（384孔板）

仪器主要功能及应用👨🏽‍🍳😾：

主要功能

◆ 可以实时在线进行高通量快速荧光定量PCR循环

◆ 可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析

◆ 可以进行多重PCR检测，并适用于多种检测模式用于基因表达分析研究，对目的基因的定量分析⚙️，进行SNP单核苷酸多态性和突变位点的分析检测

应用

◆ 非序列依赖的探针模式（SYBR Green I或其他饱和荧光染料）

◆ 序列特异的探针模式（Taqman水解探针模式，杂交探针模式，简单探针模式✋🏼，分子信标🥶，Scorpions等模式）

◆ 通过高分辨率熔解曲线分析（HRM）进行基因扫描突变检测，产物分型和SNP研究

仪器使用步骤及注意事项:

1. 操作步骤

a. 主机提前开启预热，开关在后方。

b. 按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成 384 孔板😠，注意板缺口向右下角✮。

c. 开计算机，打开LightCycler 480 软件❤️‍🔥，账号和密码贴在仪器旁边。

d. 软件开启后🎢，点选 “New Experiment”👩🏻‍🦯‍➡️，出现实验设定窗口🚨：

a） 在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Format，再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。

b） 输入反应体积👸🏻：384 well plate ，范围为 5 - 20 μL🦷。

c） 设定实验步骤 (Program)：

首先🥯：设定 program，包含有 Pre-incubation、 Amplification (PCR)、 Melting curve (optional) 与 Cooling。

设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR)  program设定成 『Quantification』，而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。

d） 点选各个 program 设定详细温度变化步骤。需要设定的参数包含 Target (℃) 目标温度、Acquisition Mode (荧光侦测模式)、Hold (hh:mm:ss) 停留时间👨🏻‍🏫。

Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度。注意：若设定温度低于 50 ℃🏃‍♀️‍➡️，请把 Ramp Rate 调整成 1.5 ℃/s ( 96 well ) 或 2.0 ℃/s ( 384 well )◀️。

e） 将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用🗾。点选左下角 “Save As Template” 即可把此步骤储存起来。

f） 若要进行套用时👧🏽，请直接点选窗口左下角 “Apply Template”🤟🏻，选择欲套用之实验步骤即可。

g） 设定完成后点选 “Start Run” 开始进行实验.

h） 跳出档案储存窗口🧑🏼‍⚕️，请输入欲储存之文件名称。

2. 注意事项

a. 实验完毕请将样品板带走，勿留在仪器内👶。

b. 进板或者出板请勿用手协助，以免引起程序混乱出错。